ACE色谱柱的选购需以分离目标为导向,综合权衡固定相特性、物理参数及系统约束。建议优先评估样品性质与分离目标,再匹配相应固定相,并通过实验验证优化方案。
以下是关于ACE色谱柱的选购要求的阐述:
一、明确应用目标与样品特性
分析物性质
极性与溶解度:若需保留强极性化合物(如多肽、糖类),优先选择亲水嵌段固定相;疏水性样品(如脂溶性维生素)则适用高碳载量的C18-HL柱。
酸碱性与稳定性:碱性化合物易与硅羟基发生次级作用,导致峰拖尾。应选用超惰性固定相(如C18系列),其通过碱灭活处理减少硅羟基残留,提升分离效果。
分离模式需求
反相色谱:常规选择C18或C8柱;若需增强对芳香族化合物的选择性,可选用苯基柱。
方法开发灵活性:对于复杂混合物(如异构体),C18-AR或C18-PFP柱融合两种键合相优势,提供差异化选择性。
二、核心物理参数选择
粒径与柱效
≤3μm粒径:适用于UHPLC,柱效最高,但背压显著增加。
5μm粒径:兼顾柱效与系统兼容性,是HPLC常用选择。
≥10μm粒径:用于快速筛选或制备级分离。
柱尺寸设计
长度:150mm为常规平衡选择,250mm适用于复杂样品,短柱用于高速分离。
内径:标准分析选4.6mm,微量分析用2.1mm,制备级选10mm以上。
孔径适配性
100Å:适用于小分子(分子量<1000 Da)。
300Å:大孔径支持蛋白质、多肽等生物大分子的分离。
三、系统兼容性与操作考量
设备适配性
UHPLC系统:须选用亚2μm填料柱,耐受高压。
制备型HPLC:选择大内径柱,降低堵塞风险。
流动相限制
高水相条件:C18-AQ柱采用极性嵌入技术,抑制亲水作用,维持稳定保留。
pH值:避免使用传统硅胶基质柱,可选择杂化颗粒或聚合物柱。