ACE色谱柱是一种具有多模式分离能力的高效液相色谱(HPLC)工具,其核心优势在于通过特殊固定相设计和灵活的流动相调控,实现多种分离模式的切换。
1. 固定相设计
混合功能基团:
ACE色谱柱的固定相通常含有多种官能团,支持多种相互作用模式。
纳米结构调控:
通过表面修饰技术(如键合硅胶、聚合物涂覆)形成均匀的纳米孔结构,增强传质效率,适应不同分子大小的分离需求。
2. 流动相调控
溶剂极性调整:
通过改变流动相中水相与有机相的比例,调节分离机制。例如:
高有机相比例:以疏水作用为主(反相色谱模式);
低有机相比例:激活极性相互作用(正相或氢键色谱模式)。
pH与离子强度:
调整流动相的pH值或添加离子对试剂,可切换离子交换(IEC)或手性分离模式。
3. 温度与梯度控制
温度敏感性:
某些ACE柱对温度变化敏感,可通过升温或降温改变固定相与溶质的相互作用强度(如氢键色谱)。
梯度洗脱:
结合梯度洗脱技术,在同一分析中实现多种分离模式的协同作用(如反相+离子交换联用)。
二、ACE色谱柱支持的分离模式:
1. 反相色谱(RPC)
原理:基于疏水相互作用,非极性物质先流出。
应用场景:分离肽类、药物小分子、天然产物等中等极性物质。
典型条件:乙腈/水或甲醇/水梯度洗脱,pH 2~7。
2. 正相色谱(NPC)
原理:基于极性吸附作用,极性物质先流出。
激活条件:使用低极性有机溶剂(如正己烷)与极性调节剂。
应用场景:分离脂溶性成分(如脂肪酸、甾体)、手性化合物。
3. 氢键色谱(HILIC)
原理:依赖固定相表面的极性基团(如酰胺、氰基)与溶质形成氢键。
典型条件:高比例水相与极性调节剂。
应用场景:极性代谢物、核苷酸、氨基酸分析。
4. 离子交换色谱(IEC)
原理:通过固定相上的离子交换位点(如磺酸基、季铵基)分离带电离子。
激活条件:调整流动相pH至溶质电离状态,或添加离子对试剂。
应用场景:蛋白质、多肽、核酸等生物大分子的电荷异构体分离。
5. 手性色谱(Chiral HPLC)
原理:固定相含手性识别位点(如纤维素衍生物、环糊精),通过立体选择性吸附分离对映体。
典型条件:正相或反相体系,搭配极性有机溶剂(如乙醇)或离子液体。
应用场景:药物分子(如布洛芬、沙利度胺)的对映体纯度检测。
