液相色谱柱是液相色谱分析系统的核心部件,通过固定相与流动相间的相互作用实现样品组分分离。该装置由柱管、压帽、筛板等部件构成,其核心分离机制基于样品中各组分在固定相(色谱柱填料)和流动相(液体溶剂)间分配系数的差异。当流动相推动样品通过色谱柱时,不同组分因极性、分子大小等性质差异,与固定相产生吸附、分配或离子交换等作用力的强弱不同,导致分配系数大的组分在固定相中停留时间更长、流出更慢,而分配系数小的组分则更快流出,最终实现按保留时间顺序分离。
根据分离机理,液相色谱柱可分为多种类型:反相色谱柱采用非极性固定相与极性流动相,适用于极性较弱物质的分离;正相色谱柱则相反,以极性固定相与非极性流动相匹配,常用于极性化合物分析。离子交换色谱柱通过离子交换作用分离带电粒子,亲水作用色谱柱专门针对极性和亲水性化合物设计,而尺寸排阻色谱柱则依据分子体积差异实现分离。
1、冲洗保养
反相柱:用完後用甲醇-水(50:50)或纯甲醇冲洗,去除缓冲盐和残留样品。
正相柱:用正己烷或氯仿冲洗,避免水分残留。
离子交换柱:用高浓度盐溶液或低pH酸/碱溶液再生填料。
2、存储条件
反相柱:保存于甲醇-水(如50:50)中,防止填料干燥裂解。
正相柱:密封保存于正己烷等非极性溶剂中,避免吸湿。
所有柱型:长期不用需加封柱接头,避免污染或溶剂挥发。
3、禁止操作
切勿用酸性或碱性流动相冲洗硅胶基质柱(如C18柱用pH>9的溶液)。
避免使用氧化性溶剂(如浓硫酸、高浓度过氧化氢)清洗柱子。