HPLC色谱柱的分类及常见故障介绍

HPLC色谱柱(分离柱)是非常重要的部件之一，一般可分为反相柱、正相柱、其他柱三类。

 

①反相色谱柱：它是使用最多的一种色谱柱；一般约占70％；其中，C18柱约占65％；C8柱占15％左右；苯基柱＜5％。反相色谱是目前应用得最为广泛的一种高效液相色谱方法。C18在反相色谱中应用得最为广泛。大概超过一半。

 

②正相色谱柱：正相色谱柱也经常被使用，它约占20％。

 

③其他色谱柱(手性柱、离子交换柱)：约占10％。

 

HPLC色谱柱的常见故障有哪些？

 

1、柱压过高

可能是微粒堵塞． 柱床膨胀，不可逆吸附， 细菌生长等造成的。也有可能是系统反压问题， 例如阻尼器堵塞，进样器堵塞， 管路或连接口堵塞。 在线过滤器不干净， 压力传感器不准确等。

2、柱效低

可能是色谱柱被污染、 过滤片部分堵塞、色谱柱内的死体积造成，例如流动相pH值或者组成不合适造成固定相损失。 流动相急剧变化造成固定相物理损坏， 机械振动造成固定相产生裂缝，柱床收缩或干枯。也有可能是仪器连接的问题， 认真检查进样器、检测器、 管路、 保护柱和在线过滤器等是否连接好，也可能是色谱柱没有平衡好， 进样量过大等问题。

3、重复性差、不出峰、回收率低

可能是色谱柱被污染， 流动相 pH值或者组成不合适造成固定相损失 ， 样 品溶剂 不同或样品本身不稳定， 固定 相极性过强或者流动相极性过弱． 或者发生非特异性吸附。也可能梯度实验时平衡时间不足，温度波动， 流动相组成改变， 样品溶剂不同， 样品稳定性不好，方法的开发不好， 缓冲液的酸碱度不合适或者缓冲能力不足。