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HPLC色谱柱的分类及常见故障介绍

发表时间:2022-07-29  |  点击率:67
HPLC色谱柱(分离柱)是非常重要的部件之一,一般可分为反相柱、正相柱、其他柱三类。
 
①反相色谱柱:它是使用最多的一种色谱柱;一般约占70%;其中,C18柱约占65%;C8柱占15%左右;苯基柱<5%。反相色谱是目前应用得最为广泛的一种高效液相色谱方法。C18在反相色谱中应用得最为广泛。大概超过一半。
 
②正相色谱柱:正相色谱柱也经常被使用,它约占20%。
 
③其他色谱柱(手性柱、离子交换柱):约占10%。
 
HPLC色谱柱的常见故障有哪些?
 
1、柱压过高
可能是微粒堵塞. 柱床膨胀,不可逆吸附, 细菌生长等造成的。也有可能是系统反压问题, 例如阻尼器堵塞,进样器堵塞, 管路或连接口堵塞。 在线过滤器不干净, 压力传感器不准确等。
2、柱效低
可能是色谱柱被污染、 过滤片部分堵塞、色谱柱内的死体积造成,例如流动相pH值或者组成不合适造成固定相损失。 流动相急剧变化造成固定相物理损坏, 机械振动造成固定相产生裂缝,柱床收缩或干枯。也有可能是仪器连接的问题, 认真检查进样器、检测器、 管路、 保护柱和在线过滤器等是否连接好,也可能是色谱柱没有平衡好, 进样量过大等问题。
3、重复性差、不出峰、回收率低
可能是色谱柱被污染, 流动相 pH值或者组成不合适造成固定相损失 , 样 品溶剂 不同或样品本身不稳定, 固定 相极性过强或者流动相极性过弱. 或者发生非特异性吸附。也可能梯度实验时平衡时间不足,温度波动, 流动相组成改变, 样品溶剂不同, 样品稳定性不好,方法的开发不好, 缓冲液的酸碱度不合适或者缓冲能力不足。
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